产品货号:
KFS151
中文名称:
细胞膜橙红色荧光探针(DiI)
英文名称:
DiI
产品规格:
10mg
发货周期:
1~3天
产品价格:
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长链二烷基羰花青化合物,特别是Dil(MW:933.88),广泛应用于固定和非固定的组织与细胞中,进行顺行或逆行的神经示踪分析。
DiI不会影响细胞的活力、生长以及基本生理特性。DiI标记运动神经元,可在培养基条件下持续跟踪长达四周,在体内长达一年。染料通过在质膜中的缓慢横向扩散均匀标记神经元,0.2~0.6mm/每天/固定标本,在活体组织里,可以达到6mm/每天。经过醛固定的组织,DiI的扩增可以持续长达1~2年。一般情况下未标记的染料不会向非标记的细胞转移,除非质膜被破坏,比如切片部位。
组分 | 规格 |
细胞膜橙红色荧光探针(DiI) | 10mg |
说明书 | 1份 |
保存:-20℃,避光,有效期1年。
- 制备储液
固体染料以DMF或者DMSO或乙醇溶解配制为1mM的储液。一旦制成的储液,需避光冷冻,储液形式可保存6个月。 - 标记悬浮细胞
- 以无血清培养基悬浮细胞密度为1×106个/mL。
- 每1mL细胞悬液加入5μL细胞标记液,混匀。
- 37℃孵育1~20分钟。不同的细胞类型所用的孵育条件不一样,可参考表格1.初始孵育时间可选择20分钟,随后再进行优化。
- 37℃,1500rpm 5分钟离心标记悬浮液。
- 去上清,用37℃的培养基轻轻悬浮细胞。
- 重复两次以上的洗涤步骤。
- 放置10分钟后进行荧光测量。
- 以无血清培养基悬浮细胞密度为1×106个/mL。
- 标记贴壁细胞
- 培养细胞至所需的汇合度。
- 取出爬片,吸去培养基,放到盖玻片湿盒中。
- 准备标记,每1mL新鲜培养基中加入5μL的标记液。
- 吸取100μL盖玻片周围的染色介质,轻轻铺匀,使之盖满整个爬片。
- 37℃孵育细胞,不同的细胞类型所用的孵育条件不一样,可参考表格1.初始孵育时间可选择20分钟,随后再进行优化。
- 去掉染色介质,用新鲜预热的培养基孵育10分钟,再更换以新的预热的培养基孵育10分钟,重复洗涤盖玻片三次。
- 培养细胞至所需的汇合度。
表1.优化的细胞染色孵育时间
Cell Line | Optimal incubation time |
Jurkat | 2minutes |
HeLa | 8minutes |
P3X | 15minutes |
3T3 | 15minutes |
表2.DiO,DiI,DiD and DiR光谱特性
Tracer | Ex(nm) | Em(nm) | Optical Filters | |
Omega | Chroma | |||
DiO | 484 | 501 | XF23 | 31001 |
DiI | 549 | 565 | XF32 | 31002 |
DiD | 644 | 665 | XF47 | 31023 |
DiR | 750 | 780 | XF112 | 41009 |
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